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Título: Avaliação da produção de melanina por Streptomyces sp. isolado do manguezal
Título(s) alternativo(s): Evaluation of melanina production by Streptomyces sp. isolated from the mangrove
Autor(es): Butzge, João Vitor
Orientador(es): Figueiredo, Luís Felipe Minozzo
Palavras-chave: Melanina
Ecologia dos manguezais
Análise espectral
Melanins
Mangrove ecology
Spectrum analysis
Data do documento: 9-Jul-2021
Editor: Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Câmpus: Toledo
Citação: BUTZGE, João Vitor. Avaliação da produção de melanina por Streptomyces sp. isolado do manguezal. 2021. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia) - Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Toledo, 2021.
Resumo: A melanina é um biopolímero, geralmente de cor escura, presente em praticamente todos os seres vivos como animais, plantas e microrganismos. Esse pigmento apresenta alta capacidade antioxidante e de absorção dos raios UV. Devido a essas propriedades, possui diversas aplicações na indústria farmacêutica, de alimentos, cosméticos, biomateriais e no setor agrícola. Esse pigmento pode ser extraído de fonte microbiológica, sendo encontrado em diversos ambientes, inclusive o manguezal. O manguezal é um ecossistema de transição do ambiente marinho, terrestre e de água doce, gerando um meio altamente singular e propenso a servir como fonte de diversidade microbiológica e de metabólitos microbianos. Tendo isso em vista, o presente trabalho visou o isolamento de microrganismos produtores de melanina de uma amostra de sedimento do manguezal, bem como a produção do pigmento e sua caracterização por técnicas de espectroscopia. Utilizou-se dois meios de cultivo distintos para o isolamento dos microrganismos do manguezal e um meio contendo tirosina para a identificação da produção de melanina. Quatro isolados foram selecionados para uma triagem inicial em meio líquido avaliado para produção de melanina e o que apresentou maiores quantidade do biopolímero purificado foi identificado por sequenciamento do gene 16S rRNA e sua árvore filogenética foi construída. O meio de cultivo elaborado foi avaliado através de um planejamento fatorial fracionado 24-1 variando-se a composição de: amido de milho, peptona de soja, extrato de levedura e tirosina e avaliou-se os efeitos que essas variáveis tiveram na produção de melanina. O pigmento obtido foi purificado pelo método de hidrólise ácida e analisada em espectrofotômetro UV-Vis e FTIR. Ao todo, obteve-se 75 isolados do manguezal e 12 apresentaram produção de pigmento escuro semelhante a melanina. Dentre os quatro microrganismos testados para produção de melanina o isolado MG08 foi escolhido como organismo modelo e identificado como Streptomyces sp. Após a análise dos resultados do planejamento estatístico, identificou-se que somente a peptona de soja teve efeito significativo na produção de melanina. O isolado MG08 produziu um máximo de 11,18 g.L-1 de melanina. Portanto, definiu-se as concentrações dos componentes do meio de cultivo como (g.L-1): amido de milho, 2,0; peptona de soja, 20,0; extrato de levedura, 12,5; L-tirosina, 1,0; sulfato de magnésio, 0,5; cloreto de cálcio, 0,1; cloreto de sódio, 5,0; sulfato de cobre, 0,05; sulfato de ferro, 0,05; pH 6,5, temperatura 28 °C, agitação 150 rpm por 7 dias. Através das técnicas de espectroscopia realizadas, o pigmento obtido foi classificado como eumelanina. Diante disso, concluiu-se que a amostra de solo do manguezal utilizada foi capaz de prover uma grande quantidade de microrganismos produtores de melanina.
Abstract: Melanin is a biopolymer, generally dark in color, present in virtually all living things such as animals, plants, and microorganisms. This pigment presents high antioxidant capacity and UV rays absorption. Due to these properties, it has several applications in the pharmaceutical, food, cosmetics, biomaterials, and agricultural industries. This pigment can be extracted from a microbiological source and is found in various environments, including mangroves. The mangrove swamp is a transitional ecosystem between marine, terrestrial, and freshwater environments, creating a highly unique environment that is prone to serve as a source of microbiological diversity and microbial metabolites. With this in mind, the present work aimed at the isolation of melanin-producing microorganisms from a mangrove sediment sample, as well as the production of the pigment and its characterization by spectroscopy techniques. Two different culture media were used for the isolation of the mangrove microorganisms and a medium containing tyrosine for the identification of melanin production. Four isolates were selected for an initial screening in liquid medium evaluated for melanin production and the one that presented the highest amount of the purified biopolymer was identified by 16S rRNA gene sequencing and its phylogenetic tree was built. The culture medium was evaluated through a 24-1 factorial design by varying the composition of: corn starch, soy peptone, yeast extract and tyrosine and the effects that these variables had on melanin production was evaluated. The pigment obtained was purified by the acid hydrolysis method and analyzed by UV-Vis spectrophotometer and FTIR. In all, 75 isolates from the mangrove were obtained and 12 showed production of dark pigment similar to melanin. Among the four microorganisms tested for melanin production, isolate MG08 was chosen as a model organism and identified as Streptomyces sp. After analyzing the results of the statistical planning, it was identified that only soy peptone had a significant effect on melanin production. The isolate MG08 produced a maximum of 11.18 g.L-1 of melanin. Therefore, the concentrations of the medium components were defined as (g.L-1): corn starch, 2.0; soy peptone, 20.0; yeast extract, 12.5; L-tyrosine, 1.0; magnesium sulfate, 0.5; calcium chloride, 0.1; sodium chloride, 5.0; copper sulfate, 0.05; iron sulfate, 0.05; pH 6.5, temperature 28 °C, agitation 150 rpm for 7 days. Through the spectroscopy techniques performed, the pigment obtained was classified as eumelanin. Therefore, it was concluded that the mangrove soil sample used was able to provide a large amount of melanin-producing microorganisms.
URI: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/30469
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