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Título: Aplicação do fungo endofítico Alternaria alternata para elicitação do metabolismo secundário de Kalanchoe daigremontiana cultivada in vitro
Título(s) alternativo(s): Application of the endophytic fungus Alternaria alternata for the elicitation of secondary metabolism from Kalanchoe daigremontiana cultivated in vitro
Autor(es): Souza, Khaoanny de
Orientador(es): Schaker, Patricia Dayane Carvalho
Palavras-chave: Agentes antiinfecciosos
Plantas - Meios de cultivo
Farmacognosia
Anti-infective agents
Plant growing media
Pharmacognosy
Data do documento: 27-Jul-2022
Editor: Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Câmpus: Toledo
Citação: SOUZA, Khaoanny de. Aplicação do fungo endofítico Alternaria alternata para elicitação do metabolismo secundário de Kalanchoe daigremontiana cultivada in vitro. 2022. Dissertação (Mestrado em Tecnologias em Biociências) - Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Toledo, 2022.
Resumo: Kalanchoe daigremontiana é uma suculenta cujas propriedades farmacológicas foram reconhecidas nos últimos anos devido ao acúmulo de vários tipos de metabólitos secundários biologicamente ativos. O cultivo in vitro de plantas é uma alternativa promissora para maximizar a produção, pois é possível garantir o cultivo e complementar o ambiente com condições que estimulam o metabolismo secundário das plantas, chamados de elicitores vegetais. Os elicitores biológicos podem ser adquiridos, por exemplo, de fungos endofíticos, aqueles que não vivem no interior das plantas sem prejudicar seus hospedeiros. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da incorporação de um concentrado celular hidrolisado (CCH) do fungo endofítico Alternaria alternata na produção de metabólitos secundários pela planta medicinal K. daigremontiana cultivada in vitro. Para tanto, foram realizadas etapas de seleção de fungos endofíticos previamente à incorporação de K. daigremontiana, a partir do isolado endofítico, utilizando, como critério de seleção, seu potencial para produzir compostos antioxidantes, foram selecionados para incorporação do CCH no meio onde foi cultivada a planta K. daigremontiana, e avaliação do perfil cromatográfico e do potencial antimicrobiano dos extratos obtidos. Dos 30 isolados, 15 deles foram recuperados em meio BDA. Dentre estes, o isolado 16 foi identificado sendo Alternaria alternata quanto ao seu potencial de produção, devido aos antioxidantes. A incorporação de CCH do isolado 16 ao meio de cultura promoveu o desenvolvimento de raízes adventícias nas plantas, visto que as raízes são consideradas parte de grande importância para a produção de metabólitos secundários. Na análise dos produtos determinados e determinados por HPLC, os extratos etanólicos obtidos das plantas cultivadas in vitro elicitadas não foram obtidos com os produtos derivados apenas em proporções. Alguns foram fornecidos in vitro apenas em plantas cultivadas. Ainda, no extrato etanólico foi possível identificar uma produção de ácido ferúlico apenas em plantas cultivadas in vitro, em uma planta cultivada in vivo, indicando que o cultivo in vitro pode ativar o metabolismo secundário da espécie. O extrato de acetato de etila das plantas possui duas substâncias únicas in vitro para este cultivo. O extrato etanólico de K. daigremontiana apresentou atividade antimicrobiana contra S. aureus e E. coli, independente da condição de cultivo frontal, e o cultivo de plantas cultivadas in vitro apresentou menor valor de CMI, com melhores resultados para E. coli, comparado para S. aureus. Desta forma, o cultivo mostrou-se uma alternativa viável nos resultados de crescimento e metabolismo secundário, levando a uma melhor atividade antibiótica e promovendo raízes adventícias.
Abstract: Kalanchoe daigremontiana is a succulent whose pharmacological properties have been recognized in recent years due to the accumulation of several types of biologically active secondary metabolites. The in vitro cultivation of plants is a promising alternative for maximizing production, since it is possible to guarantee the cultivation and complement the environment with conditions that stimulate secondary plant metabolism, called plant elicitors. Biological elicitors can be, for example, acquired from endophytic fungi, those that do not live inside plants without harming their hosts. In this context, the present study aimed to evaluate the effect of the incorporation of a hydrolyzed cell concentrate (CHC) of the endophytic fungus Alternaria alternata on the production of secondary metabolites by the medicinal plant K. daigremontiana cultivated in vitro. For this purpose, selection steps of endophytic fungi were performed prior to the incorporation of K. daigremontiana, from the endophytic isolate, using, as a selection of choice, its potential to produce isolated alternatives, selected by CHC in the medium of isolated prevention of CHC in the medium where the plant K. daigremontiana was cultivated, and evaluation of the chromatographic profile and the antimicrobial potential of the extracts obtained. Of the 15 of them isolated, 15 of them will be recovered in PDA medium. Among the 16 was selected, identified Alternaria alternata to its production potential, due to antioxidants. The incorporation of CHC from isolate 16 to the culture medium promoted the development of adventitious in the plants, the roots considered for the production of secondary metabolites. In the analysis of the products determined and determined by HPLC, the ethanol extracts obtained from the elicited in vitro cultivated plants were not obtained with the derived products only as proportions. Some were provided in vitro only on cultivated plants. Also, in the ethanol extract it was possible to identify a production of ferulic acid only in plants grown in vitro, in a plant grown in vivo, indicating that in vitro cultivation can activate the secondary metabolism of the species. The ethyl acetate extract of plants has two substances unique in vitro for this cultivation. The ethanolic extract of K. daigremontiana showed antimicrobial activity against S. aureus and E. coli, regardless of the condition of front cultivation, and the cultivation of cultivated plants elicited in vitro showed lower CMI value, with better results for E. coli, compared to S. aureus. In this way, the cultivation proved to be a viable alternative in growth and secondary micro metabolism results, leading to better antibiotic activity and promoting adventitious roots.
URI: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/30035
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