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Título: Otimização da extração de compostos fenólicos das folhas de Tabernaemontana catharinensis e avaliação dos marcadores de estresse oxidativo em ratos diabéticos
Título(s) alternativo(s): Optimization of phenolic compound extraction from Tabernaemontana catharinensis leaves and evaluation of oxidative stress markers in diabetic mice
Autor(es): Sari, Rafael
Orientador(es): Thomé, Gustavo Roberto
Palavras-chave: Fenóis
Cromatografia a líquido de alta eficiência
Antioxidantes
Extração (Química)
Phenols
High performance liquid chromatography
Antioxidants
Extraction (Chemistry)
Data do documento: 24-Set-2018
Editor: Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Câmpus: Pato Branco
Citação: SARI, Rafael. Otimização da extração de compostos fenólicos das folhas de Tabernaemontana catharinensis e avaliação dos marcadores de estresse oxidativo em ratos diabéticos. 2018. 96 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia de Processos Químicos e Bioquímicos) - Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Pato Branco, 2018.
Resumo: Tabernaemontana catharinensis (T. catharinensis) é uma planta medicinal da flora brasileira a qual se destaca por apresentar alto potencial antioxidante. A planta é conhecida popularmente como cobrina e suas folhas, cascas e raízes são empregadas no combate a doenças relacionadas com estresse oxidativo tais como as gastroenterites, a sífilis e a hanseníase. O objetivo do presente estudo foi otimizar a extração de compostos fenólicos de T. catharinensis utilizando delineamento fatorial 23 variáveis solventes (Etanol e Acetato de Etila), tempo (30 e 60 minutos) e temperatura( 350 e 650 C) para posteriormente analisar as atividades antioxidantes in vitro e o efeito sob o estresse oxidativo no modelo experimental animal de diabetes. Na avaliação da capacidade antioxidante in vitro foi determinado o poder de sequestro dos radicais 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH) e 2,2-azino-bis-(3-etil-benzotiazolina-6-ácidosulfônico) (ABTS), poder antioxidante de redução do ferro (FRAP), e oxidação do sistema β-caroteno/ácido linoleico. No modelo experimental animal de diabetes foram determinados: a peroxidação lipídica (TBARS), catalase (CAT), glutationa s-transferase (GST) e superóxido dismutase (SOD) nos tecidos de fígado, rim, baço e cérebro total de ratos Wistar. A caracterização e quantificação do perfil de compostos fenólicos foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e o conjunto de dados foi analisado pela metodologia de superfície de resposta e análise dos componentes principais (PCA). Utilizando o extrato A8 o qual foi a melhor condição de extração para as determinações, in vitro e ex vivo, foi utilizado. Os resultados demonstram que o solvente etanol foi mais eficiente na extração dos compostos fenólicos da T. catharinensis incorporado à maior temperatura (65 0C) e tempo (60 min). O solvente acetato de etila majoritariamente extraiu o composto fenólico pinocembrina o qual possui característica de extração em menor polaridade utilizando a temperatura de 65 0C e o tempo de 60 min. Os 8 resultados in vitro demonstraram que o extrato A8 possui ação antioxidante satisfatória com 23,34 mg de EAG/g-1 para CFT, 34,26 μmol de Trolox para DPPH, 24,13 μmol Fe2+ para FRAP, 12,57 μmol Trolox para ABTS e 78,85 AA% para o β-caroteno/ácido linoleico. Os resultados dos marcadores de estrese oxidativo em ratos diabéticos demonstraram que o extrato A8 das folhas de T. catharinensis administrado via gavagem em ratos diabéticos diminuiu a atividade da GST no fígado e da SOD no cérebro total. Conclui-se que a metodologia desenvolvida para a extração dos compostos fenólicos das folhas da T. catharinensis é promissora e apresenta potencial antioxidante in vitro satisfatório, porém a utilização do extrato A8 da planta para combater o estresse oxidativo no modelo experimental animal de diabetes não demonstrou ser eficiente e requer estudos adicionais para aplicação como antioxidante em atividades biológicas.
Abstract: Tabernaemontana catharinensis (T. catharinensis) is a medicinal plant of the Brazilian flora which stands out for its high antioxidant potential. The plant is popularly known as blancule and its leaves, barks and roots are used to combat diseases related to oxidative stress such as gastroenteritis, syphilis and leprosy. The objective of the present study was to optimize the extraction of phenolic compounds from T. catharinensis using a factorial design of 23 solvent variables (Ethanol and Ethyl Acetate), time (30 and 60 minutes) and temperature (350 and 650 0C) to later analyze the activities antioxidants in vitro and the effect under oxidative stress in the animal experimental model of diabetes. In the evaluation of the in vitro antioxidant capacity the sequestering power of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2-azino-bis- (3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid) radicals was determined ABTS), antioxidant iron reduction power (FRAP), and oxidation of the β-carotene / linoleic acid system. In the animal experimental model of diabetes, lipid peroxidation (TBARS), catalase (CAT), glutathione s-transferase (GST) and superoxide dismutase (SOD) were determined in liver, kidney, spleen and total brain tissues of Wistar rats. The characterization and quantification of the profile of phenolic compounds were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) and the data set was analyzed by response surface methodology and principal component analysis (PCA). Using extract A8 which was the best extraction condition for the determinations, in vitro and ex vivo, was used. The results demonstrate that ethanol solvent was more efficient in extracting the phenolic compounds of T. catharinensis incorporated at higher temperature (65 0C) and time (60 min). The solvent ethyl acetate mostly extracted the phenolic compound pinocembrina which has characteristic of extraction in less polarity using the temperature of 65 ° C and the time of 60 min. In vitro results demonstrated that the A8 extract has a satisfactory antioxidant action with 23.34 mg EAG / g-1 for CFT, 34.26 μmol Trolox for DPPH, 24.13 μmol Fe2+ for FRAP, 12.57 10 μmol Trolox for ABTS and 78.85% AA for β-carotene / linoleic acid. The results of oxidative stress markers in diabetic rats demonstrated that the A8 extract from the leaves of T. catharinensis administered via gavage in diabetic rats decreased GST activity in the liver and SOD in the whole brain. It is concluded that the methodology developed for the extraction of the phenolic compounds from the leaves of T. catharinensis is promising and has a satisfactory in vitro antioxidant potential. However, the use of the plant extract A8 to combat oxidative stress in the experimental animal model of diabetes did not demonstrate be efficient and requires additional studies for application as an antioxidant in biological activities.
URI: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/3599
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